Il test ELISA rileva numerose malattie, motivo per cui è stato ampiamente utilizzato in medicina e non solo. Tuttavia, il test ELISA è meglio conosciuto per la sua diagnosi della malattia di Lyme. Cos'è il test ELISA? Come interpretare i risultati? Qual è il prezzo del test?

Contenuto:

  1. Test ELISA - cosa rileva? Uso dell'ELISA
  2. Test ELISA - qual è il test?
  3. Test ELISA e malattia di Lyme - quando eseguire?
  4. Test ELISA - prezzo. Quanto costa un test ELISA?
  5. Test ELISA - risultati. Possono essere falsi positivi?
  6. Test ELISA - risultati. Possono essere falsi negativi?

Il test ELISA , ovvero il test di immunoassorbimento enzimatico, è un metodo di laboratorio comunemente utilizzato che serve, tra gli altri, per la determinazione quantitativa degli anticorpi nel sangue

A causa di questoTest ELISAtrovatoapplicazionenella diagnosi di malattie batteriche, comeMalattia di Lyme con Lyme

Il vantaggio del metodo ELISA è la sua semplicità, rapidità di esecuzione e alta sensibilità. Il metodo ELISA viene eseguito utilizzando speciali piastre di plastica con pozzetti riempiti ad esempio con proteine ​​Borrelia (antigeni) e anticorpi monoclonali specifici, progettati per rilevare gli anticorpi nel campione del paziente.

Test ELISA - cosa rileva? Uso dell'ELISA

L'elevata sensibilità e semplicità del metodo ELISA lo ha reso applicabile nella diagnosi di molte malattie, ma è meglio conosciuto come il metodo diagnostico della malattia di Lyme.

Nella diagnosi della borreliosi di Lyme, la cosiddetta ELISA indiretto, che consente di rilevare IgM o IgG specifiche nel materiale testato. Allo stesso modo, gli anticorpi possono essere rilevati a fini diagnostici:

  • infezioni virali: virus dell'herpes (herpes, herpes zoster, Epstein-Barr, citomegalovirus), HIV, virus dell'epatite (HBV e HCV)
  • infezioni da protozoi: toxoplasmosi, giardiasi
  • malattie autoimmuni: celiachia (anticorpi anti-tTG o anti-DPG), malattia di Hashimoto (anticorpi anti-TG e anti-TPO), malattie infiammatorie intestinali (anticorpi anti-ASCA e anti-ANCA)
  • malattie parassitarie e allergie,in cui vengono rilevati anticorpi IgE specifici. Il loro aumento del livello può indicare la presenza di allergie, ad esempio al polline e al cibo, o invasioni parassitarie (tenia armata, nematode umano)

Esistono anche modifiche al metodo ELISA (cosiddetto sandwich ELISA), che consentono la rilevazione di un campione testato di proteine ​​diverse dagli anticorpi. Quindi lo scopo della ricerca è quello di rilevare nel materiale biologico:

  • frammenti di virus o batteri, il più delle volte si tratta di antigeni specifici di un determinato agente patogeno
  • ormoni sierici, ad esempio estrogeni, prolattina, TSH, fT4, cortisolo
  • enzimi come calprotectina, elastasi pancreatica, fosfatasi alcalina
  • marker tumorali, ad esempio CA-125
  • presenza di farmaci nel siero

Questo metodo viene utilizzato anche nell'industria alimentare, dove è possibile rilevare tracce di allergeni (ad es. latte, arachidi), OGM o tossine negli alimenti.

Test ELISA - cos'è questo test?

La diagnosi, ad esempio, di borreliosi di Lyme con il metodo ELISA consiste nel rilevare le proteine ​​immunitarie nel materiale biologico - anticorpi che si formano durante la risposta agli antigeni di Borrelia.

Gli anticorpi sono testati in due classi, IgM e IgG. Le IgM sono i primi anticorpi ad apparire nell'organismo al contatto con i batteri e a diminuire nel tempo.

Il loro posto è occupato da anticorpi IgG più persistenti che possono rimanere nel corpo per diverse decine di anni.

In questo modo, la presenza di batteri nell'organismo viene verificata indirettamente rilevando gli anticorpi specificamente diretti contro le spirochete Borrelia.

Gli anticorpi nei vari stadi dell'infezione possono essere diretti contro una varietà di proteine ​​Borrelia. Ad esempio, in una fase iniziale è la proteina p41.

Nelle fasi successive, iniziano ad apparire sempre più proteine, come p21, p30, p39, p43. Questo è il motivo per cui la diagnosi della malattia di Lyme è estremamente difficile.

La selezione delle proteine ​​batteriche è estremamente importante affinché il test abbia un alto valore diagnostico. Pertanto, di routine nella diagnosi della malattia di Lyme, dovrebbero essere utilizzati test ELISA di II o III generazione, in cui i set di proteine ​​sono selezionati in modo da ottenere il risultato più affidabile.

Test ELISA e malattia di Lyme. Quando esibirsi?

La borreliosi di Lyme è una malattia batterica causata dal batterio Borrelia burgdorferi e dalle sue numerose varietà.

La diagnosi della malattia non è facile a causa della complessità della risposta immunitaria contro Borrelia e delle imperfezioni dei metodi di laboratorio.

Il metodo di laboratorio più utilizzato è il metodo ELISA ad alta sensibilità che rileva gli anticorpi specifici generati contro le proteine ​​batteriche.

Nella diagnosi della borreliosi di Lyme viene utilizzato un metodo ELISA indiretto in cui si distinguono le seguenti fasi:

  • incubazione dei pozzetti sulla piastra con materiale raccolto dal paziente, ad esempio siero. Se ci sono anticorpi contro Borrelia nel materiale testato, si legano alle proteine ​​sul fondo del pozzetto di reazione
  • quindi il siero in eccesso viene risciacquato con uno speciale liquido di lavaggio (tampone) e il cosiddetto coniugato, cioè un anticorpo legato a un enzima che si lega agli anticorpi precedentemente collegati nei pozzetti di reazione
  • Il substrato per il coniugato viene aggiunto in un secondo momento e non c'è (positivo) o nessuna reazione cromatica (negativa)
  • l'ultimo passo è la lettura da parte del lettore (spettrofotometro) della concentrazione di anticorpi contro Borrelia nel siero del paziente

Il metodo ELISA per la malattia di Lyme si esegue con il sangue e, in caso di sintomi neurologici (neuroborreliosi), anche con il liquido cerebrospinale.

Il liquido sinoviale non deve essere testato in quanto vi è un' alta probabilità di risultati falsi positivi.

La base per la diagnosi della malattia sono i sintomi clinici che la indicano, confermati dai risultati degli esami di laboratorio.

L'aggiunta di un risultato di un test di laboratorio senza la presenza di sintomi non autorizza la diagnosi della malattia di Lyme, in quanto è stato dimostrato che gli anticorpi contro le spirochete Borrelia vengono rilevati anche nelle persone sane.

La diagnosi sierologica della borreliosi di Lyme inizia con un test di screening ELISA semiquantitativo. Se il risultato è negativo significa che non sono state rilevate spirochete Borrelia o il risultato è falso negativo.

Se il risultato è positivo o debolmente positivo (equivoco), test Western blot di conferma, che è altamente specifico.

Questo per confermare la "verità" dei risultati ottenuti con il metodo ELISA. Durante la diagnostica, non è possibile s altare nessuno dei passaggi precedenti e, ad esempio, eseguire la diagnostica utilizzando il metodo Western blot o effettuare una diagnosi basata su un risultato positivo solo utilizzando il metodo ELISA.

In Polonia, la diagnosi della malattia di Lyme termina molto spesso con la prima fase di screening, causando un'errata interpretazione dei risultati positivi o debolmente positivi.

Vale la pena saperlo

Test ELISA - prezzo. Quanto costa un test ELISA?

Il test costa circa 60zloty ed è fatto subito. Tuttavia, puoi attendere circa tre mesi per i risultati del referral.

Test ELISA - risultati. Possono essere falsi positivi?

Risultati falsi positivi derivano dalla reattività crociata degli anticorpi IgM con altre proteine. Gli anticorpi prodotti dall'organismo possono "erroneamente" riconoscere un antigene di altri microrganismi come l'antigene Borrelia.

Gli "errori" più comuni si verificano nelle persone con infezione da treponema pallidum, virus dell'herpes e nelle persone con lupus eritematoso sistemico e altre malattie reumatiche.

Test ELISA - risultati. Possono essere falsi negativi?

Nella fase iniziale dell'infezione possono comparire risultati falsi negativi, quindi il test deve essere ripetuto dopo circa 3-4 settimane. Questo è chiamato finestra sierologica, ovvero il periodo iniziale di infezione in cui l'organismo non è ancora "riuscito" a produrre anticorpi specifici.

Allo stesso modo, nelle persone immunocompromesse che non producono abbastanza anticorpi.

Un grosso problema, soprattutto nelle infezioni molto intense, è la comparsa del cosiddetto immunocomplessi costituiti da antigeni spirocheti di Borrelia e anticorpi specifici per essi.

Questo rende gli anticorpi "invisibili" ai metodi comunemente usati come ELISA e, sebbene siano presenti nel materiale testato, non possono essere rilevati.

In questi casi, il laboratorio può utilizzare la scomposizione di immunocomplessi. Questo trattamento è progettato per rilasciare gli anticorpi. Tuttavia, questo metodo non è ampiamente utilizzato a causa della mancanza di standardizzazione nei laboratori.

Vale la pena saperlo

Perché la diagnosi della malattia di Lyme non è facile?

Ciò è dovuto alla complessità della risposta immunitaria contro Borrelia e ai limiti dei metodi di laboratorio. La diversità delle varietà e l'emergere di nuove infezioni che causano infezioni, soprattutto nel continente europeo, non facilitano lo sviluppo di metodi diagnostici efficaci.

Altre varietà sono apparse recentemente in Europa, come Borrelia bissetii, Borrelia valaisiana e Borrelia spielmanii. Inoltre, nel corpo, le spirochete Borrelia possono trasformarsi in cisti o rimanere in punti del corpo inaccessibili alle cellule del sistema immunitario.

Essere così "invisibili" al sistema immunitario. Inoltre, è stato dimostrato che i tessuti possono contenere frammenti di batteri che hanno proprietà fortemente pro-infiammatorie. Si ritiene che siano responsabili dei sintomi cronici della malattia di Lyme, nonostante i risultati negativi dello studiolaboratorio.

Riferimenti

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Circa l'autoreKarolina Karabin, MD, PhD, biologa molecolare, diagnostica di laboratorio, Cambridge Diagnostics PolskaBiologo di professione, specializzato in microbiologia, e diagnostico di laboratorio con oltre 10 anni di esperienza nel lavoro di laboratorio. Laureato al College of Molecular Medicine e membro della Società Polacca di Genetica Umana, è responsabile delle borse di ricerca presso il Laboratorio di Diagnostica Molecolare del Dipartimento di Ematologia, Oncologia e Malattie Interne dell'Università di Medicina di Varsavia. Ha difeso il titolo di dottore in scienze mediche nel campo della biologia medica presso la 1a Facoltà di Medicina dell'Università di Medicina di Varsavia. Autore di numerosi lavori scientifici e divulgativi nel campo della diagnostica di laboratorio, della biologia molecolare e della nutrizione. Quotidianamente, in qualità di specialista nel campo della diagnostica di laboratorio, dirige il dipartimento dei contenuti presso Cambridge Diagnostics Polska e collabora con un team di nutrizionisti presso la CD Dietary Clinic. Condivide le sue conoscenze pratiche sulla diagnostica e la terapia dietetica delle malattie con specialisti in conferenze, sessioni di formazione e in riviste e siti web. È particolarmente interessata all'influenza dello stile di vita moderno sui processi molecolari nel corpo.

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